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耐藥株構(gòu)建
價格:0.00
貨號:000747
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產(chǎn)品概述
實驗流程:
1.準備細胞、藥物后,檢測藥物IC50(72h),待IC50(SPSS軟件統(tǒng)計)結(jié)果
出來后,與客戶匯報進展,推進項目(預(yù)計時間2-3周);
2.采用藥物共培養(yǎng)的方式構(gòu)建耐藥株,具體為:調(diào)整細胞密度60%左右,藥物濃
度為IC5、IC10、IC20、IC30,含藥培養(yǎng)48-72h后撤藥(采用6孔板實驗,具體
時間已顯微鏡觀察為準(細胞死亡不超過20%),拍照記錄),換入正常培養(yǎng)基,
觀察細胞狀態(tài),
3.在加藥共培養(yǎng)的過程中,觀察細胞每次加藥培養(yǎng)后的狀態(tài)和恢復(fù)速度,如果細
胞在撤藥后,恢復(fù)時間較長(超過7天),狀態(tài)較差,則說明該細胞不適合構(gòu)建耐
藥株,成功概率較低,建議終止實驗;(預(yù)計總時間2月內(nèi))
4.待細胞生長恢復(fù)后,凍存一支,重復(fù)步驟2(依據(jù)細胞情況,可適當提高藥物
濃度),進行5~8輪培養(yǎng)后,即可構(gòu)建出有一定耐藥性的細胞
5.細胞構(gòu)建完成后,給客戶提供一株親本株和一株耐藥株,提交的結(jié)果是親本株
和耐藥株的IC50結(jié)果,耐藥倍數(shù)(大于5倍)和實驗報告;(預(yù)計總時間8-10月)
STR鑒定
參考文獻
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FAQs
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